Разработка приемов повышения чувствительности методов выделения риккетсий

Основные направления эпидемиологического надзора за риккетсиозами
Конструирование и сравнительное испытание иммуноферментных коньюгатов
Результаты сопоставления методов мониторинга риккетсий группы клещевых пятнистых лихорадок
Разработка приемов повышения чувствительности методов выделения риккетсий
Использование методов микроанализа для идентификации штаммов риккетсий группы клещевой пятнистой лихорадки
Заключение

Как свидетельствуют результаты работы, одной из особенностей природных очагов клещевого риккетсиоза в современный период является значительное распространение на урбанизированных территориях штаммов R. sibirica, отличающихся невысокой вирулентностью и иммуногенностью для морских свинок. Это требует совершенствования методов первичной изоляции и репродукции риккетсий, прежде всего с использованием различных вариантов культур клеток и стимуляторов репродукции.

В связи с относительно невысоким и нестабильным накоплением риккетсий на традиционных лабораторных моделях (морские свинки, белые мыши, куриные эмбрионы) неоднократно предпринимались попытки использования более чувствительных моделей (культуры клеток) или повышения чувствительности существующих, используя различные физические и химические факторы. В 60-е годы для культивирования риккетсий были применены культуры клеток различного происхождения, как первично получаемые, так и перевиваемые (Bozeman F.M. et al., 1956; Schaehter M. et al., 1957; Г. П. Сомов, Р.А. Слонова, 1965; А.К. Голованова и др., 1968; И.Н. Кокорин, 1965). В связи с низкой производительностью рутинного метода культур клеток, даже несмотря на более интенсивное накопление риккетсий, но продуктивности и общедоступности преимущественное значение сохраняет выращивание на куриных эмбрионах (П.Ф. Здродовский, Е.М. Голиневич, 1972).

В целях повышения чувствительности традиционных моделей накопления риккетсий ранее использовали охлаждение, рентгеновское облучение, безвитаминную диету у животных, циклофосфамид и другие цитостатики и др. (П.Ф. Здродовский, Е.М. Голиневич, 1972). Известно, что риккетсий группы КПЛ наиболее интенсивно размножаются в условиях пониженного метаболизма клеток хозяина (Stoenner Н. et al., 1962; Ф.И. Крас ник, 1966, и др.), в то время как биологически активные вещества преимущественно усиливают метаболизм клеток. В экспериментальных условиях показано влияние на репродукцию риккетсий кортизона (Price М., 1953; Н.Н. Рыбкина, 1961; В.А. Яблонская, 1963, и др.), дифосфопиридина и коэнзима A (Bovarnick М., Allen Е., 1954, 1957; Gilford J., Price М., 1955). Работы по изучению изменений репродукции риккетсий под влиянием химических веществ требуют дополнительного обоснования в направлении как поиска более эффективных стимуляторов, так и выяснения механизмов их действия. В качестве альтернативных вариантов для первичной изоляции R. sibirica были использованы куриные эмбрионы, культуры клеток ФЭК, СПЭВ, МК-2 в различных модификациях, включая микрокультуры, химические вещества - кандидаты в стимуляторы репродукции риккетсий: гидрокортизон, инсулин, пиридоксин, фтористый натрий.

Несмотря на более высокую чувствительность в сопоставлении с методом биопробы на морских свинках, первичная изоляция риккетсий на куриных эмбрионах была затруднена в связи со значительной контаминацией переносчиков посторонней микрофлорой. Тем не менее с использованием куриных эмбрионов из пробы клещей D. nuttalli, отрицательной в РНГА и положительной в ИФА, выделен штамм R. sibirica «37/89-Горный», депонированный во Всероссийском музее риккетсиальных культур ФГУН «НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» РАМН.

Эксперименты по применению биостимуляторов для повышения репродукции риккетсий проведены на пятисуточных куриных эмбрионах с оценкой степени накопления R. sibirica и R. conorii в МФА и по методу П.Ф. Здродовского. В качестве предлагаемых стимуляторов репродукции риккетсий испытаны фтористый натрий (1 мг на куриный эмбрион), гидрокортизон (5 мг), инсулин (4 ЕД), пиридоксин (10 мг). Использованы овокультуры R. sibirica (штаммы «105/87» и «107/87», R. conorii (штамм «МК-1»). Для заражения куриных эмбрионов использованы желточные мешки с относительно небольшим накоплением риккетсий (на + или ++). В качестве основного критерия использовали процент куриных эмбрионов с накоплением риккетсий на ++ и более, поскольку такие желточные мешки используют для получения антигенных препаратов.