Лихорадка Западного Нила (подробно)

Больные с подозрением на ЛЗН исследуются на наличие IgM и IgG-антител к ВЗН в иммуноферментном анализе. В некоторых случаях диагноз подтверждается в тесте нейтрализации вируса (PRNT). Однако хотя PRNT более специфичен, он требует условий специализированной лаборатории и в обычных практических лабораториях не проводится.

Вирусспецифические IgM-антитела выявляются в острой фазе (< или = 8 дней после начала болезни) в образцах сыворотки в большинстве подтвержденных случаев.

В тяжелых случаях IgM-антитела могут присутствовать в сыворотке более 12 месяцев (в среднем 7-8 месяцев), т. е. наличие IgM-антител - не обязательно признак острой болезни. Поэтому предполагаемые случаи острого менингита или энцефалита должны быть подтверждены наличием вирусспецифических IgM в СМЖ или появлением IgG-антител в сыворотке в период выздоровления. ПЦР для диагноза не может заменять тесты по выявлению антител, которые эффективны для диагностики ЛЗН.

• IgM-антитела могут появиться в СМЖ до выявления в сыворотке, вскоре после обнаружения в ней вируса. Учитывая, что IgM слишком велики для прохождения через гематоэнцефалический барьер, они могут образовываться локально В-клетками, проникающими в СМЖ, и оставаться там до 200 дней. Длительность сохранения IgM имеет диагностическое значение. Как правило, серопозитивность сывороток связывают с подтверждением сезонности заболевания. Однако, если уровни IgM сохраняются более 1 года, это может привести к ложным представлениям о времени заболеваемости.

Потенциальные вируснейтрализующие антитела обычно принадлежат к IgG-изотипу. У людей IgG-антитела к ВЗН обычно не обнаруживают в сыворотке до 2-3-й недели заболевания, когда основные клинические симптомы при легкой форме уже исчезают. У большинства больных титры IgG-антител низкие. Авидность IgG со временем повышается. Первоначально IgG иногда могут быть выявлены в СМЖ до появления IgM, даже IgG в сыворотке.

Антигенная структура ВЗ изучена достаточно хорошо. Разработка эффективных вакцин зависит от знаний в отношении протективных эпитопов вируса. При экспериментальной инфекции формируются антитела против Е, prM, NS1, NS3 и NS5, но только антитела против Е-белка идентифицированы как нейтрализующие и протективные. Единственная другая мишень протективных антител - белок NS1, который секретируется инфицирующими клетками и не присутствует на поверхности вируса.

Парные сыворотки (1-8 дней после начала болезни) и в фазе выздоровления (14-21 день) должны быть исследованы в ИФА или тестах нейтрализации вируса. Хотя положительный результат IgM при исследовании одной сыворотки в острой фазе болезни свидетельствует о недавней инфекции, отрицательный результат недостаточен для суждения об отсутствии инфекции, что требует исследования парных образцов.

При подозрении на арбовирусное поражение ЦНС у умершего пациента необходимо исследование образцов мозга, включая разные участки оболочки, среднего мозга и ствола мозга. Образцы тканей должны быть разделены -половина заморожена при 70 °С, а другая - сохраняться в формалине. Исследование секционного материала должно включать микроскопию, гистопатологию, тесты ОТ-ПЦР, выделение вируса и иммуногистохимию.

Клиническая характеристика нейроинвазивной формы ЛЗН у большинства больных не отличается от других вирусных инфекций. Поэтому диагностика основана на дифференциальных лабораторных исследованиях.

При проведении лабораторных исследований доставляемых образцов от больных необходимы сведения о времени появления симптомов болезни, даты взятия образца, состоянии иммунного статуса (наличие иммуносупрессии), нахождении больного в эндемичном по ЛЗН регионе, наличии предшествующей вакцинации против флавивирусных инфекций (желтая лихорадка клещевой энцефалит и др.), предположительный клинический диагноз (менингоэнцефалит, серозный менингит и др.).

Подавление гемагглютинации также может использоваться для скринирования образцов, однако для проведения теста необходим вирусный антиген, источник которого - мозг мышей, зараженных вирусом. Поскольку в ИФА могут наблюдаться перекрестные реакции с возбудителями других флавивирусных инфекций (денге, желтая лихорадка, клещевой энцефалит и др.), серологически положительные образцы должны быть подтверждены в тесте нейтрализации вируса, а также проверены в серологических реакциях с другими арбовирусами, известными для данного региона.

В США для антигенного анализа используют методы иммуногистохимии (ИГХ) с помощью вирусспецифических моноклональных антител. При исследовании ткани мозга от людей и птиц ИГХ могут быть использованы фиксированные формалином срезы мозга, а также биопробами могут служить биопсия и секционный материал.

Методы анализа нуклеиновых кислот (ОТ-ПЦР) рекомендуются для исследования пулов комаров, СМЖ, тканей мозга людей, животных и птиц.

Попытки выделения вируса из пораженных тканей могут быть предприняты на всех известных клеточных линиях. Предпочтительными у больных людей является спинномозговая жидкость (сывороточные образцы могут быть использованы в начале инфекции), секционный материал - ткани мозга. От погибших лошадей - ткань мозга (включая ствол мозга), ткань спинного мозга; от птиц - почки, мозг, сердце; от других животных - различные органы, особенно почки и мозг.

Подтверждением при идентификации выделенного вируса служит непрямой МФА, выявление нуклеиновых кислот или нейтрализация вируса. Для подтверждения штаммов вируса могут быть использованы методы секвенирования генома.

Предыдущая страница | Страница 6 из 10 | Следующая страница

Содержание