И.Н. Манзенюк, О.Ю. Манзенюк. Клещевые боррелиозы (болезнь Лайма). Кольцово. 2005 г.

Содержание

8. СРАВНИТЕЛЬНЫЕ СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ РАЗЛИЧНЫХ ИММУНОФЕРМЕНТНЫХ ТЕСТ-СИСТЕМ В ГИСК ИМ. Л.А. ТАРАСЕВИЧА

До настоящего времени в Российской Федерации отсутствовали зарегистрированные иммуноферментные тест-системы для выявления антител к возбудителям иксодовых клещевых боррелиозов. В последние годы в нашей стране активизировались исследования, направленные на разработку боррелиозных диагностических препаратов, прежде всего на основе иммуноферментного и иммунофлюоресцентного анализа.

В 2003 году в лаборатории стандартизации и контроля МИБП против арбовирусных инфекций, риккетсиозов и СПИД под руководством проф. М.С. Воробьевой были проведены исследования, посвященные сравнительному анализу иммуноферментных тест-систем, направленных на выявление антител к B. burgdorferi sensu lato [219–221]. Для приготовления иммуносорбента в данных диагностических препаратах были использованы нативные или рекомбинантные антигены боррелий.

Тест-системы на основе нативных антигенов боррелий

«Боррелиоз-ИФА»

Производитель: Государственный научный центр прикладной микробиологии, г. Оболенск, Россия. В качестве антигена использован природный (корпускулярный) антиген, полученный из отечественного штамма П1 B. afzelii, выделенного разработчиками на территории Московской области. В антигене, по данным авторов, представлены иммунореактивные белки с молекулярной массой 93, 80, 66, 60, 58, 45, 41, 39, 37, 34, 31, 28, 23, 21, 18 кДа, общие для геновидов B. garinii, B. afzelii и B. burgdorferi sensu stricto. Конъюгат – поливалентные кроличьи антитела к иммуноглобулинам человека, меченные пероксидазой хрена. Хромоген AБТС (2,2’-азино-ди-3-этилбензиазолин сульфонат). Исследуемый образец сыворотки или плазмы крови человека используется при постановке ИФА в разведении 1:200. В связи с использованием поливалентного конъюгата тест-система предназначена для выявления суммарных антител к возбудителям иксодовых клещевых боррелиозов в сыворотке крови человека.

«Enzygnost Borreliosis – IgG+IgM»

Производитель: «Dade Behring Marburg GmbH», Германия. Вкачестве антигена использован природный антиген, выделенный из штаммов PKo B. afzelii. В связи с тем, что в конъюгатах используется F(ab)’ фрагмент кроличьих анти-IgG или козьи анти-IgM человека, меченных пероксидазой хрена, тест-система предназначена для параллельного тестирования сывороток или плазмы крови на IgG и/или IgМ к B. burgdorferi sensu lato (комбинированный вариант).

Тест-системы на основе рекомбинантных антигенов боррелий

«Боррелиоз-ИФА – IgG» и «Боррелиоз-ИФА – IgМ»

Производитель: ООО «Омникс» (ранее ООО НПФ «Хеликс»), г. Санкт-Петербург, Россия. В качестве антигена использована композиция рекомбинантных антигенов боррелий двух видов: DbpA из B. afzelii и B. garinii, p41 из B. garinii, OspC из B. afzelii и B. garinii, p35 из B. afzelii. Конъюгат –моноклональные мышиные антитела против IgG или IgM человека. Хромоген – ТМБ. Разведение исследуемых сывороток – 1:100.

«ЛаймБест – IgG»

Производитель: ЗАО «Вектор-Бест», г. Новосибирск, Россия. В качестве антигена использована смесь рекомбинантных антигенов трех видов боррелий: VlsE из B. burgdorferi sensu stricto, p41 и BmpA из B. garinii, OspC из B. afzelii. Конъюгат – козьи антивидовые антитела к IgG человека, меченные пероксидазой хрена, хромоген – ТМБ. Разведение исследуемых сывороток – 1:10.

«Borrelia – IgG recombinant»

Производитель: «Biomedica», Австрия. В качестве антигена использована смесь рекомбинантных антигенов трех видов боррелий: р21 – OspC из B. burgdorferi sensu stricto и B. garinii, p41i – внутренняя часть флагеллина из B. garinii, p18 и p100 из B. afzelii. Конъюгат – кроличьи антитела к IgG человека, меченные пероксидазой хрена. Разведение исследуемых сывороток – 1:100.

В качестве материала для проводимого исследования были использованы образцы сыворотки крови, полученные от больных боррелиозом, имевших в анамнезе присасывание клеща и патогномоничный симптом – мигрирующую эритему. Сыворотки были получены от пациентов с клиническим диагнозом ранний боррелиоз (I стадия) в количестве 57 образцов, а также от больных с клиническим диагнозом боррелиоз II и III стадии: пациенты с нейроборрелиозом – 2 образца, с Лайм-артритом – 12 образцов, с хроническим акродерматитом – 9 образцов. Для определения неспецифических перекрестных реакций в исследование были включены сыворотки, полученные от различных групп больных с патологией неборрелиозной этиологии.

Чувствительность и специфичность иммуноферментных тест-систем, используемых для выявления иммуноглобулинов класса G

«ЛаймБест – IgG»

Тест-система «ЛаймБест – IgG» выявляла специфические иммуноглобулины класса G в 36 образцах сывороток крови из 57 образцов, полученных от пациентов с клиническим диагнозом ранний боррелиоз (I стадия), что составляет 63,2%. Анализ сывороток крови от больных боррелиозом II и III стадии (23 образца) показал, что тест-система «ЛаймБест – IgG» выявляла иммуноглобулины класса G в 19 сыворотках из 23 образцов, что составляет 82,6%. Таким образом, суммарная чувствительность для тест-системы «ЛаймБест – IgG» составила 68,8%. Тест-система «ЛаймБест – IgG» давала ложноположительный результат с 11 сыворотками (доноров – 4, беременных – 2, больных лептоспирозоной инфекцией – 2, системной красной волчанкой – 2 и одна сыворотка с высоким содержанием РФ фактора-1). Специфичность тест-системы составила 94,4%.

«Боррелиоз-ИФА – IgG»

При анализе 57 сывороток крови, полученных от больных ранним боррелиозом (I стадия), было показано, что тест-система «Боррелиоз-ИФА – IgG» выявляла специфические иммуноглобулины класса G в 31 образце (54,4%). Анализ сывороток кровиот больных боррелиозом II и III стадии показал, что тест-система “Боррелиоз-ИФА – IgG” выявляла как положительные 20 сывороток из 23 исследованных образцов, что составляет 87,0%. Таким образом, суммарная чувствительность для этой тест-системы составила 63,8%. Специфичность, т.е. отсутствие ложноположительных реакций, была исследована на 196 сыворотках крови здоровых доноров и лиц с заболеваниями неборрелиозной этиологии. Тест-система «Боррелиоз-ИФА – IgG» дала один ложноположительный результат при анализе сывороток доноров. Специфичность тест-системы составила 99,5%.

«Enzygnost Borreliosis – IgG»

При анализе 57 сывороток крови, полученных от больных ранним боррелиозом (I стадия), показано, что тест-система «Enzygnost Borreliosis – IgG» выявляла специфические иммуноглобулины класса G в 18 образцах, что составляет 31,6%. Анализ сывороток крови от больных клещевым боррелиозом (II и III стадии) показал, что тест-система «Enzygnost Borreliosis – IgG»выявляла как положительные 20 из 23 исследованных образцов, что составляет 87,0%. Таким образом, суммарная чувствительность для этой тест-системы составила 47,5%. Тест-система «Enzygnost Borreliosis – IgG» дала ложноположительные результаты с 6 сыворотками (доноров – 3, беременных – 1, детей – 1 и одна сыворотка с высоким содержанием РФ фактора-1) из 196 образцов контрольной группы сывороток крови человека. Специфичность тест-системы составила 96,9%.

Процент корреляции результатов между тест-системой «Enzygnost Borreliosis – IgG» и тест-системами «ЛаймБест – IgG» и «Боррелиоз-ИФА – IgG» составил 88,9 и 94,4%, соответственно, при I стадии, а также 95,0% для обеих тест-систем при II и III стадиях. Суммарный процент корреляции результатов анализа сывороток крови человека на иммуноглобулины класса G к B. burgdorferi sensu lato в тест-системе «Enzygnost Borreliosis – IgG» и позитивными в отечественных тест-системах был высок и варьировал в пределах 92,1±4,4–94,7±3,6%.

«Borrelia IgG recombinant»

При анализе 57 сывороток крови, полученных от больных ранним боррелиозом (I стадия), тест-система «Borrelia IgG recombinant» выявляла специфические иммуноглобулины класса G в 19 образцах, что составляет 33,3%. Анализ 23 образцов сывороток крови от больных боррелиозом II и III стадии показал, что тест-система «Borrelia IgG recombinant» выявляла как иммуноглобулины класса G в 19 сыворотках из 23 образцов, что составляет 82,6%. Таким образом, суммарная чувствительность для тест-системы «Borrelia IgG recombinant» составила 47,5%.

Процент корреляции результатов между тест-системой «Borrelia IgG recombinant» и тест-системами «ЛаймБест – IgG» и«Боррелиоз-ИФА – IgG» составил 88,9 и 94,4%, соответственно, при I стадии, а также 95 и 87%, соответственно, при II и III стадиях.

Тест-система «Borrelia IgG recombinant» дала ложноположительные результаты с 9 сыворотками (доноров – 2, беременных – 1, больных лептоспирозом – 1, сифилисом – 1, СКВ – 2, больных с ЦМВ-инфекцией – 1 и одна сыворотка с высоким содержанием РФ фактора-1) из 196 образцов контрольной группы сывороток крови человека. Специфичность тест-системы составила 95,4%. В тест-системах «ЛаймБест – IgG» и «Borrelia IgG recombinant» отмечен небольшой перекрест с сыворотками, полученными от больных системной красной волчанкой и лептоспирозом.

Чувствительность и специфичность иммуноферментных тест-систем, используемых для выявления иммуноглобулинов класса M

На том же клиническом материале были получены результаты диагностической эффективности первой отечественной тест-системы, используемой для выявления IgM к B. burgdorferi sensu lato.

«Боррелиоз-ИФА – IgМ»

При анализе 57 сывороток крови, полученных от больных с I стадией клещевого боррелиоза, показано, что тест-система «Боррелиоз-ИФА – IgМ» выявляла как позитивную 31 сыворотку, что составляет 54,4%. Анализ сывороток крови от больных инфекцией II–III стадии показал, что тест-система «Боррелиоз-ИФА – IgМ» выявляла 7 из 23 образцов (30,4%). Эти же сыворотки выявляются и тест-системой «Enzygnost Borreliosis – IgМ». Анализ сывороток крови контрольной группы выявил, что рекомбинантная тест-система «Боррелиоз-ИФА – IgМ» обладает высокой специфичностью – 99,0%. Только две сыворотки (от доноров) из 196 образцов давали ложноположительный результат (в повторе).

«Enzygnost Borreliosis – IgМ»

При анализе 57 сывороток крови, полученных от больных с I стадией клещевого боррелиоза, показано, что тест-система «Enzygnost Borreliosis – IgМ» выявляла 32 позитивные сыворотки (56,1%). Анализ сывороток крови от больных инфекцией II–III стадии показал, что «Enzygnost Borreliosis – IgМ» выявлял 9 из 23 образцов (39,1%). Процент корреляции результатов тест-системы «Боррелиоз-ИФА – IgМ» по отношению к тест-системе «Enzygnost Borreliosis – IgМ» составил при раннем боррелиозе I стадии 87,5%, при II и III стадии – 77,8%, в целом – 85,4±3,9%. Специфичность тест-системы «Enzygnost Borreliosis – IgМ» на группе контрольных сывороток крови человека составила 94,9%. Десять сывороток (доноров – 3, беременных – 1, детей – 1, больных Эпштейна-Бара – 3, СКВ – 1, сифилис – 1 и одна сыворотка с высоким содержанием РФ фактора-1) из 196 образцов дали в данной тест-системе ложноположительный результат. Следует отметить, что две ложноположительные сыворотки, выявляемых в донорской группе, были положительны в обеих тест-системах, и их окончательная характеристика возможна только с помощью высокоспецифичных подтверждающих тестов, пока не разработанных в нашей стране. Проведенные исследования согласуются с данными зарубежных авторов о низком проценте обнаружения серопозитивных сывороток крови на IgM у больных поздним боррелиозом, когда хорошо выражен иммунный ответ организма на возбудитель и в большинстве случаев выявляются IgG, особенно при атрофическом акродерматите (до 100%).

Чувствительность и специфичность иммуноферментных тест-систем, используемых для выявления суммарных антител или комбинации IgG+IgM

«Боррелиоз-ИФА»

Результаты проведенных исследований показали, что при анализе сывороток крови больных с I стадией Лайм-боррелиоза тест-система «Боррелиоз-ИФА» выявляла 18 позитивных сывороток (суммарные антитела) из 57 образцов, или 31,6%. Анализ сывороток от больных инфекцией II–III стадии показал, что тестсистема «Боррелиоз-ИФА» выявляла 18 позитивных сывороток из 23 образцов, что составляет 78,3%. Таким образом, суммарная чувствительность этой тест-системы составила 45,0%. Анализ выявил, что 41 сыворотка крови из 196 образцов давала ложноположительный результат в тест-системе «БоррелиозИФА». В данной тест-системе отмечены перекрестные реакции с сыворотками больных сифилисом; системной красной волчанкой; цитомегаловирусной инфекцией; инфекцией, вызываемой вирусом Эпштейна-Барра; с высоким содержанием РФ и т. д. Таким образом, специфичность тест-системы «Боррелиоз-ИФА» составила 79,1%. Воспроизводимость результатов, определенная при анализе положительных проб для данной тест-системы, составила 90%.

«Enzygnost Borreliosis – IgG+IgM»

Анализ сывороток крови (57 образцов, I стадия клещевого боррелиоза) показал, что суммарно зарубежная тест-система «Enzygnost Borreliosis – IgG+IgM», созданная по сходной технологии с тест-системой «Боррелиоз-Ифа», выявляла 38 сывороток крови из 57 образцов, или 66,7%. Анализ сывороток крови от больных боррелиозом II–III стадии показал, что тест-система «Enzygnost Borreliosis – IgG+IgM» выявляла 21 сыворотку крови из 23 образцов, что составило 91,3%. Таким образом, суммарная чувствительность зарубежной тест-системы «Enzygnost Borreliosis – IgG+IgM» в данных группах составила 73,8%.

Процент корреляции результатов тест-системы “БоррелиозИФА” по отношению к тест-системе “Enzygnost Borreliosis – IgG+IgM” при анализе сывороток крови от больных ранним и поздним боррелиозами составил 61,0±6,4%. Как было показано, 16 сывороток из 196 образцов давали ложноположительный результат в данной тест-системе. Следует отметить, что 10 из 16 ложноположительных образцов в тест-системе «Enzygnost Borreliosis – IgG+IgM» отнесены, согласно инструкции по применению, к категории сомнительных. Суммарная специфичность тестсистемы «Enzygnost Borreliosis – IgG+IgM» составила 91,8%.

«Боррелиоз-ИФА – IgМ»+«Боррелиоз-ИФА – IgG»

Анализ 57 сывороток крови, полученных от больных с I стадией клещевого боррелиоза показал, что суммарно тест-системы «Боррелиоз-ИФА – IgМ»+«Боррелиоз-ИФА – IgG» выявляли 44 сыворотки крови из 57 образцов, или 77,2%. Анализ сывороток крови от больных инфекцией II–III стадии показал, что суммарно тест-системы «Боррелиоз-ИФА – IgМ»+«Боррелиоз-ИФА – IgG» выявляли 20 сывороток крови из 23 образцов (87,0%). Таким образом, чувствительность анализа при совместном применении тест-систем «Боррелиоз-ИФА – IgМ»+«Боррелиоз-ИФА – IgG» в данных группах составила 80,0%. Суммарная специфичность тест-систем «Боррелиоз-ИФА – IgМ»+«Боррелиоз-ИФА – IgG» на контрольной группе сывороток крови человека составила 98,5%. Ложноположительный результат был выявлен только в трех сыворотках крови (от доноров) из 196 образцов контрольной группы.

Исследования, проведенные в ГИСК им. Л.А. Тарасевича, подтвердили необходимость одновременного использования при скрининге тест-систем, направленных на выявление IgG и IgM к боррелиям (в нашем случае «Боррелиоз-ИФА – IgМ» и «Боррелиоз-ИФА – IgG», «Enzygnost Borreliosis – IgG+IgM»). Использование данной комбинации тест-систем позволяет достичь более высоких показателей выявления специфических антител при анализе сывороток крови от больных ранним боррелиозом, который наиболее сложен для серодиагностики.

В результате проведенных исследований также было показано, что иммуноферментные тест-системы, основанные на применении рекомбинантных антигенов, обладают более высокими показателями специфичности, чем тест-системы, в которых в качестве иммуносорбента используются нативные антигены боррелий.

Результаты исследований четырех отечественных тест-систем, представленных для регистрации в МЗ РФ, позволили рекомендовать к внедрению в практику здравоохранения три из них: «Боррелиоз-ИФА – IgМ» и «Боррелиоз-ИФА – IgG», производства ООО «Омникс»; «ЛаймБест – IgG», производства ЗАО «Вектор-Бест».

Предыдущая страница | Страница 9 из 13 | Следующая страница

Читайте также:
»Иксодовые клещи - переносчики клещевых инфекций
»Лихорадка Западного Нила
»Как удалить клеща
»Средства и методы защиты от клещей
»Иммуноглобулин (противоклещевой)
»Адреса лабораторий по исследованию клещей
»Вопрос-ответ
»Фото переносчиков клещевого боррелиоза (болезни Лайма)