Конструирование и сравнительное испытание иммуноферментных коньюгатов

Основные направления эпидемиологического надзора за риккетсиозами
Конструирование и сравнительное испытание иммуноферментных коньюгатов
Результаты сопоставления методов мониторинга риккетсий группы клещевых пятнистых лихорадок
Разработка приемов повышения чувствительности методов выделения риккетсий
Использование методов микроанализа для идентификации штаммов риккетсий группы клещевой пятнистой лихорадки
Заключение

Отработаны оптимальные условия постановки ИФА для вы явления антигенов риккетсий группы КПЛ. Для постановки ИФ использовали «сэндвич»-вариант метода (Volker A. et al., 1978). В качестве «подложки» использовали иммуноглобулиновые фракции с активностью в РСК не менее 1:400. Планшеты сенсибилизировали различными разведениями фракций IgG с концентрацией по белку от 0,1 до 100 мкг/мл. Оптимальной оказалась концентрация 10 мкг/мл. Методика постановки ИФА описана нами ранее (С.Н. Шпынов, Н.В. Рудаков, 1989). Результаты определяли визуально или на Мультискане. Каждую постановку реакции сопровождали контролем. В качестве положительного контроля использовали цельнорастворимый антиген R. sibirica для РСК (производства Пермского филиала ФГУП «НПО «Микроген»), в качестве отрицательного - гетерологические антигены R. prowazekii, Chlamydia psittaci, Coxiella burnetti.

Испытание тест-системы ИФА проведено на антигенах, приготовленных из желточных мешков куриных эмбрионов. Использовали коммерческие цельнорастворимые антигены R. sibirica, R. prowazekii, R. mooseri, Chlamydia psittaci и корпускулярный антиген Coxiella burnetti 2-й фазы, а также экспериментальные серии полученных нами по стандартным методикам цельнорастворимых антигенов R. sibirica музейных штаммов «К-1», «Нецветаев» и авторских штаммов «105/87», «107/87», «24/86», «54/88», «37/89» (депонированы во Всероссийском музее риккетсиальных культур), R. conorii «М-1», R. canadensis «2678», Kakari «Тогер» и «МК/Каплан», а также корпускулярные антигены R. sibirica штаммов «105/87» и «107/87».

Результаты исследований свидетельствуют, что тест-система ИФА работает со всеми использованными цельнорастворимыми антигенами риккетсий группы КПЛ при отрицательных результатах с гетерологичными антигенами риккетсий группы СТ и лихорадки Ку, хламидий. Более высокие показатели экстинции получены при исследовании антигенов Kakari (таблица 26). Следовательно, разработанная тест-система ИФА для выявления антигенов риккетсий группы КПЛ является группоспецифической, выявляя цельнорастворимые антигены R. sibirica, Kakari R. conorii в разведениях от 1:200 до 1:1000 (в зависимости от серии) от его рабочего разведения. В РНГА с иммуноглобулиновым эритроцитарным диагностикумом антиген R. sibirica выявляли, как правило, до разведений 1:32-1:64 от рабочего разведения в РСК, т.е. ИФА как минимум в 10-120 раз чувствительнее РНГА при выявлении цельнорастворимых антигенов риккетсий группы КПЛ.

В то же время при исследовании в ИФА корпускулярных антигенов R. sibirica, содержащих по данным МФА большое количество риккетсий (до++++), выявлены лишь слабоположительные результаты. Полученные данные свидетельствуют о том, что тест-система ИФА выявляет антигены преимущественно в растворимой форме. Подтверждением этого является значительное увеличение уровня экстинции при исследовании в ИФА корпускулярного антигена R. sibirica, подвергнутого троекратному воздействию градиента температур (замораживание в жидком азоте с последующим нагреванием при 56°С), в сравнении с необработанным антигеном. Указанная обработка способствует переходу части антигена в растворимую фазу, что делает его доступным для выявления в ИФА. Необходимо также отметить, что по данным РНГА температурная обработка антигенов в интервале 37-60°С дает резкое снижение гемагглютинирующей активности, а при 60-70°С вызывает полную инактивацию, в то время как в ИФА эти пробы давали четкий положительный результат.

Страница 1 | Страница 2 | Страница 3

Читайте также:
»Иксодовые клещи и клещевые инфекции
»Клещевой риккетсиоз
»История изучения риккетсиоза
»Этиология, эпидемиология, клиника, диагностика и лечение риккетсиозов
»Микробиологическая и эпидемиологическая характеристика очагов клещевого риккетсиоза в Сибири и на Дальнем востоке России
»Клиника, диагностика и лечение клещевого риккетсиоза
»Фото переносчиков клещевого риккетсиоза

»Список сокращений