Конструирование и сравнительное испытание иммуноферментных коньюгатов

Основные направления эпидемиологического надзора за риккетсиозами
Конструирование и сравнительное испытание иммуноферментных коньюгатов
Результаты сопоставления методов мониторинга риккетсий группы клещевых пятнистых лихорадок
Разработка приемов повышения чувствительности методов выделения риккетсий
Использование методов микроанализа для идентификации штаммов риккетсий группы клещевой пятнистой лихорадки
Заключение

Последнее десятилетие характеризуется интенсивным развитием современных методов микроанализа при исследовании целого ряда инфекций, в том числе и риккетсиозов. Среди методов микроанализа все более широкое распространение находят различные варианты ИФА, преимуществами которых являются высокая чувствительность, специфичность, экономичность и возможность объективного инструментального учета результатов. Анализ работ отечественных и зарубежных исследователей свидетельствует, что ИФА до настоящего времени применяется преимущественно в экспериментальной работе и - в гораздо меньшем объеме - для диагностики риккетсиозов (В.А. Яблонская, А.В. Кузнецова, 1989). Наибольшее количество исследований посвящено ИФА-методам выявления антириккетсиальных антител (А.В. Кузнецова и др., 1985; Cracea Е. et al., 1983; Doller G. et al., 1984; E.H. Горбачев и др., 1989, и многие др.). ИФА-методы выявления риккетсий (их антигенов) нашли пока менее широкое применение. Разработана тест-система для выявления ИФА антигенов коксиелл Бернета (Е.Н. Горбачев и др., 1988). Имеются работы по определению иммуноферментным методом корпускулярных антигенов R. prowazekii и R. sibirica (А.В. Кузнецова и др., 1985; Ю.А. Недялков и др., 1985,1988; Э.И. Дробышевская и др., 1989). В США осуществлен цикл работ по изучению с помощью набора моноклональных антител в иммуноблоггинге антигенных характеристик риккетсий группы КПЛ (Anacker R. et al., 1985, 1987 а, б и др.).

Иммуноферментные методы в системе эпидемиологического надзора за риккетсиозами группы КПЛ до настоящего времени не применялись. Отсутствуют сравнительные данные о специфичности и чувствительности конъюгатов для ИФА, приготовленных из иммунного сырья различных видов лабораторных животных, для выявления риккетсий группы КПЛ, а также сопоставлении тест-систем ИФА с традиционными методами риккетсиологических исследований.

Использование ИФА для выявления и идентификации риккетсий группы КПЛ целесообразно только при условии достаточно высокой специфичности и чувствительности конъюгатов.

Указанное требование в определенной степени сопряжено с необходимостью отработки оптимальных условий получения высокоактивного иммунного сырья из сывороток крови лабораторных животных различных видов с неодинаковой степенью видоспецифичности к риккетсиям группы КПЛ. Наиболее полно вопросы получения гипериммунных сывороток к R. sibirica отражены в работах В.А. Яблонской с соавт. (1985), В.А. Яблонской И.В. Тарасевич (1985). Сыворотки крови животных с высокими титрами антител к риккетсиям группы КПЛ получают при иммунизации овокультурами риккетсий, а также в изогенной системе с использованием длительных схем иммунизации и адъюванта с компонентами микробного происхождения. При этом образуются иммуноглобулины широкого спектра специфичности, в то числе антижелточные (В.А. Яблонская и др., 1985), антитканевые и др., иногда в титрах, превышающих титры специфических антител, что значительно затрудняет конструирование видоспецифических диагностических препаратов. Указанная проблема частично может быть решена путем отработки оптимально условий получения иммунного сырья и использования для получения конъюгатов и сенсибилизации «подложки» сывороток крови различных видов животных, учитывая неодинаковую степень их видоспецифичности к риккетсиям (Pickens et al., 1965, и др.). Наиболее оптимальным является получение гипериммунных сывороток в изогенной системе с адъювантом без микробных компонентов, поскольку применение овокультур и адъювантов с компонентами микробного происхождения способствует снижению их специфичности.