Микробиологическая диагностика риккетсиозов

Риккетсии
Семейство Rickettsiaceae
Таксономия Rickettsials
Краткая характеристика рода Rickettsia
Антигенное строение риккетсий
Культуральные и физиологические особенности
Микроэкология возбудителей, круг хозяев и среда естественного обитания
Генетическая характеристика
Факторы патогенности
Клинические проявления в связи с особенностями инфекционного процесса
Основные нозологические формы и особенности клинического и эпидемиологического проявления риккетсиозов
Иммунитет при риккетсиозах
Эколого-эпидемиологическая характеристика
Микробиологическая диагностика риккетсиозов
Определение чувствительности к антибактериальным препаратам
Лечение и профилактика
Апатогенные риккетсии и концепция эндоцитобиоза прокариотов
Географическое распространение риккетсий группы КПЛ
Экспериментальные методы изучения риккетсии в переносчиках

Гибель эмбрионов при культивировании риккетсий группы сыпного тифа наступает в более поздние сроки (6-10-е сутки после заражения, иногда и позже), чем риккетсий группы КПЛ (4-6-е сутки), сопровождается более интенсивным накоплением риккетсий при менее выраженных изменениях геморрагического характера. Заражение куриных эмбрионов коксиеллами Бернета вызывает относительно позднюю гибель эмбрионов (6-8-е сутки) при интенсивном размножении возбудителя без выраженных изменений самого эмбриона.

Для культивирования риккетсий могут быть использованы как первично трипсинизированные, так и перевиваемые культуры клеток. Большинство видов риккетсий размножается в культурах клеток почечного эпителия, мезотелия, перевиваемых линиях клеток Vero, HeLa, Нер-2, L929. Коксиеллы Бернета хорошо размножаются также в культурах фибробластов куриного эмбриона и морских свинок, макрофагов и ретикулярных клеток костного мозга и селезенки. Получены данные о возможности культивирования на культурах клеток Vera и Нер-2 риккетсий, не культивируемых на традиционных моделях - морских свинках и куриных эмбрионах (R. tarasevichiae, риккетсий подгруппы R. massiliae).

Для пассирования культуры клеток подвергают версенизации по стандартной методике. Культуры клеток Vero и Нер-2 выращивают в стеклянных флаконах, засев проводят в концентрации 150 тыс. клеток на 1 мл. В качестве питательной среды используют среду Игла MEM с двойным набором аминокислот, к общему объему добавляют до 10 % эмбриональной сыворотки. Подготовленные флаконы заражают 10 %-ной риккетсиальной суспензией в объеме 0,5 мл на флакон. Зараженные флаконы центрифугируют при 800 об/мин при температуре +22 °С в течение 30 мин, после центрифугирования во все флаконы добавляют среду поддержки (Игла MEM с добавлением эмбриональной сыворотки до 1 %) в объеме 1,5 мл на флакон. Флаконы с зараженными клетками культивируют в углекислотном термостате при температуре 35,6 °С в течение 8 суток. После завершения инкубации все флаконы подвергают замораживанию в низкотемпературном холодильнике на -20 °С, а потом оггаиванию для разрушения клеток и максимального выхода из них микроорганизмов. После оггаивания материал центрифугируют 10 минут при 3000 об/мин, супернатант в объеме 0,5 мл берут на следующий пассаж, а из 0,2 мл делают мазки, остатки супернатанта хранят в криопробирках в низкотемпературном холодильнике. Инфицированность и стерильность культуры клеток определяют в мазках, окрашивая их по Романовскому - Гимзе, и методом флюоресцирующих антител. Отсутствие посторонней микрофлоры в пассажах контролируется также посевом на питательные среды (сахарный бульон, тиогликолевая среда, среда Сабуро, среды на микоплазмы).

Развитие инфекции в клеточных культурах у различных видов родов Rickettsia и Orientia отличается. Для риккетсий Провачека и ориенций цуцугамуши характерно накопление микроорганизмов в больших количествах в отдельных клетках. Дегенеративные изменения клеток вследствие перепроизводства возбудителя сопровождаются их разрывом и освобождением микроорганизмов с распространением инфекции на соседние клетки.

У риккетсий группы КПЛ накопление возбудителя в отдельных клетках не сопровождается их переполнением, риккетсий еще на ранней стадии выходят из клеток без существенных их повреждений с быстрым распространением инфекции клеточной культуры. Дегенеративные изменения клеток обусловлены преимущественно токсическим действием риккетсий.

Читайте также:
»Иксодовые клещи и клещевые инфекции
»Клещевой риккетсиоз
»История изучения риккетсиоза
»Микробиологическая и эпидемиологическая характеристика очагов клещевого риккетсиоза в Сибири и на Дальнем востоке России
»Клиника, диагностика и лечение клещевого риккетсиоза
»Основные направления эпидемиологического надзора за риккетсиозами
»Фото переносчиков клещевого риккетсиоза

»Список сокращений